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| 產(chǎn)地 | 北京 |
| 品牌 | Solarbio |
| 貨號 | BC1190 |
| 用途 | |
| 包裝規(guī)格 | 50管/24樣 |
| 純度 | % |
| CAS編號 | |
| 是否進口 |
產(chǎn)品詳細描述
產(chǎn)品內(nèi)容：
試劑一：液體×1瓶，4℃保存。
試劑二：粉劑×1瓶，4℃保存。
試劑三：液體×1支，-20℃保存。
試劑四：液體×1瓶，4℃保存。
工作液配制：臨用前，在試劑二中加入試劑一40 mL，充分震蕩溶解后加入全部試劑三，混勻。（當(dāng)天用完）
產(chǎn)品說明：
谷胱甘肽過氧化物酶（glutathione peroxidase, GSH-Px）是谷胱甘肽氧化還原循環(huán)中催化還原型谷胱甘肽（GSH）氧化的主要酶之一。GSH-Px不僅能夠特異地催化還原型谷胱甘肽與ROS反應(yīng)，生成氧化型谷胱甘肽GSSG，從而保護生物膜免受ROS的損害，維持細胞的正常功能；而且具有保護*、提高機體免疫力、拮抗有害金屬離子對機體的傷害和增加機體抗輻射等能力。
GSH-Px催化H2O2氧化GSH，產(chǎn)生GSSG；谷胱甘肽還原酶（GR）催化NADPH還原GSSG，再生GSH，同時NADPH氧化生成NADP+；NADPH在340 nm有特征吸收峰，而NADP+沒有；可以通過測定340 nm光吸收減少速率來計算GSH-Px活性。
自備儀器和用品：
紫外-可見分光光度計、低溫離心機、水浴鍋、可調(diào)節(jié)移液器、1mL石英比色皿和蒸餾水。
操作步驟：
一、粗酶液提?。?/span>
組織：按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(mL)為1：5~10 的比例（建議稱取0.1g 組織，加入1mL 試劑一）進行冰浴勻漿。10000rpm，4℃離心10min，取上清置冰上待測(如上清不清澈，再離心3min)。
細菌、真菌：按照細胞數(shù)量104個：試劑一體積（ml）500~1000:1 的比例，建議500 萬細胞加入1mL 試劑一），冰浴超聲波破碎細胞（功率300w，超聲3 s，間隔7s，總時間3min）然后10000rpm，4℃，離心10min，取上清置冰上待測(如上清不清澈，再離心3min)。
血清等液體：直接測定。
二、GSH-Px測定操作：
1. 分光光度計預(yù)熱30 min，調(diào)節(jié)波長到340 nm，蒸餾水調(diào)零。
2. 混合試劑在25℃或者37℃（哺乳動物）水浴中預(yù)熱30min以上。
3. 空白管：依次在1mL石英比色皿中加入100μL蒸餾水、800μL預(yù)熱的工作液，100μL試劑四，迅速混勻后于340nm處測定第10 s處的吸光值，37℃水浴3min后迅速拿出測量吸光度，分別記為A空1和A空2。計算△A空=A空1-A空2。（空白管只需做1~2個）
4. 測定管：依次在1mL石英比色皿中加入100μL上清液、800μL預(yù)熱的工作液，100μL試劑四，迅速混勻后于340nm處測定第10 s處的吸光值，37℃水浴3min后迅速拿出測量吸光度，分別記為A測1和A測2。計算△A測=A測1-A測2。
三、GSH-Px活性計算：
（1）按蛋白濃度計算
GSH-Px活力單位定義：一定溫度下，每mg蛋白在反應(yīng)體系中每分鐘催化1nmol NADPH氧化定義為一個酶活力單位。
GSH-Px (U/mg prot) =[ (△A測定管-△A空白管)÷ε÷d×V反總×106] ÷[Cpr×V樣]÷T
=536×(△A測定管-△A空白管)÷Cpr
（2）按樣本鮮重計算
GSH-Px活力單位定義：一定溫度中，每g樣品在反應(yīng)體系中每分鐘催化1μmol NADPH氧化定義為一個酶活力單位。
GSH-Px (U/g 鮮重)=[ (△A測定管-△A空白管)÷(ε×d)×V反總×106] ÷(V樣÷V樣總×W)÷T
=536×(△A測定管-△A空白管)÷W
(3) 按細胞數(shù)量計算
GSH-Px 活力單位定義：一定溫度中，每104個細胞每分鐘催化1μmol NADPH 氧化定義為一個酶活力單位。
GSH-Px (U/104 cell)=[(△A 測定管-△A 空白管)÷ε÷d×V 反總×109]÷（細胞數(shù)量×V 樣÷V樣總）÷T
=536×(△A 測定管-△A 空白管)÷細胞數(shù)量
(4) 按液體體積計算
GSH-Px 活力單位定義：一定溫度中，每毫升液體每分鐘催化1μmol NADPH 氧化定義為一個酶活力單位。
GSH-Px (U/ml)=[(△A 測定管-△A 空白管)÷ε÷d×V 反總×109]÷V 樣÷T
=536×(△A 測定管-△A 空白管)
△A空白管=A空1-A空2；△A測定管=A測1-A測2。
ε：NADPH摩爾消光系數(shù)6.22×103L/mol/cm；d：比色皿光徑，1 cm；V反總：反應(yīng)體系總體積，0.001 L；106：1 mol=1×106μmol；Cpr：上清液蛋白濃度（mg/mL）；V樣：加入反應(yīng)體系中上清液體積，100μL =0.1 mL；T：反應(yīng)時間，3 min；W ：樣品質(zhì)量，g。
注意事項：
（1）樣品處理等過程均需要在冰上進行，且須在當(dāng)日測定酶活力；
（2）混合試劑和底物液須臨用前配制，配完后置于冰上；
（3）測定過程操作須迅速；
（4）細胞中GSH-Px活性測定時，細胞數(shù)目須在300萬-500萬之間，細胞中GSH-Px的提取時可加試劑一后研磨或超聲波處理，不能用細胞裂解液處理細胞。
相關(guān)文獻：
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《Antioxidant activity of whole grain Qingke (Tibetan Hordeum vulgare L.) toward oxidative stress in d-galactose induced mouse model》 作者:Xuejuan Xia,Yuxiao,Xing,Guannan Li,Jinsong Wu,Jianquan Kan 期刊:Journal of Functional Foods 影響因子:3.197 PMID:
《Toxic effect of microcystin-LR on blood vessel development》 作者:Qilong Wang, Guosheng Xiao, Guoliang Chen, Huihui Du, Linping Wang,Dongqin Guo & Tingzhang Hu 期刊:Toxicological & Environmental Chemistry 影響因子:3.547 PMID:28189720
《Cell death induced by α-terthienyl via reactive oxygen species-mediated mitochondrial dysfunction and oxidative stress in the midgut of Aedes aegypti larvae》 作者:JieZhangaShakilAhmadaLan-YingWangaQianHanbJian-ChunZhangaYan-PingLuo 期刊:Free Radical Biology and Medicine 影響因子:5.657 PMID:31022448
