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| 產(chǎn)地 | 北京 |
| 品牌 | Solarbio |
| 貨號(hào) | P8860 |
| 用途 | 本品易感染細(xì)菌，需無菌條件下操作。 |
| 包裝規(guī)格 | 200ml/KIT |
| CAS編號(hào) | |
| 純度 | 現(xiàn)詢客服% |
| 是否進(jìn)口 | 否 |
保存：18-25℃保存，有效期2年。本品易感染細(xì)菌，需無菌條件下操作。無菌條件下操作，啟封后置于常溫保存。如4℃保存，本分離液易出現(xiàn)白色結(jié)晶，影響分離效果。
試劑盒內(nèi)容：
樣本稀釋液 200mL
清洗液 200mL
*組織淋巴細(xì)胞分離液 200mL
淋巴細(xì)胞分離方法
1. 制備*的單細(xì)胞懸液。
2. 取一支適當(dāng)?shù)碾x心管，加入與*單細(xì)胞懸液等量的分離液（分離液最少不得少于3 mL，總體積不能超過離心管的三分之二，否則會(huì)影響分離效果）。
3. 小心吸取單細(xì)胞懸液加于分離液液面上，注意保持兩液面界面清晰。（可以使用巴氏德吸管吸取單細(xì)胞懸液，然后小心的平鋪于分離液上，因?yàn)閮烧叩拿芏炔町?，將形成明顯的分層界面。）
4.
5. 離心后，此時(shí)離心管中由上至下細(xì)胞分四層。第一層為稀釋液層；第二層為環(huán)狀乳白色淋巴細(xì)胞層；第三層為透明分離液層；第四層為紅細(xì)胞層。
6. 用吸管小心吸取第二層環(huán)狀乳白色淋巴細(xì)胞至另一潔凈的15mL離心管中，向離心管中加入10ml細(xì)胞洗滌液洗滌白膜層細(xì)胞，250g，離心10min。
7. 棄上清，5mL的PBS或細(xì)胞清洗液重懸細(xì)胞，250g，離心10min。
8. 重復(fù)步驟7
9. 棄上清，細(xì)胞重懸備用。
| 分層示意圖 |
*單細(xì)胞懸液的制備方法
*研磨的方法：
1. 無菌條件下摘取*，撕去*被膜，用眼科剪將*剪成小塊。
2. 將尼龍篩網(wǎng)或者是細(xì)胞過濾篩放置于平皿上，加入少量全血及組織稀釋液（保證*及獲得的細(xì)胞處于液體環(huán)境中）。
3. 將*放置于篩網(wǎng)上，使用注射器活塞或者是無菌鑷子來研磨*（盡量控制研磨力度，保持篩網(wǎng)懸空，避免在皿底上直接研磨而造成大批細(xì)胞死亡）
4. 研磨完全后使用全血及組織稀釋液沖洗篩網(wǎng)，收集細(xì)胞懸液，再經(jīng)濾網(wǎng)過濾。
注：
A. 可用酶消化法，使用膠原酶對*組織進(jìn)行消化，得到單細(xì)胞懸液。
B. 如果最終得到的細(xì)胞需要培養(yǎng)，那全過程所需試劑與器材均要求無菌。
C. 根據(jù)*的體積控制單細(xì)胞懸液的濃度在108~109個(gè)/mL。
注意事項(xiàng)：
A. 開封前顛倒混勻，本分離液為無菌產(chǎn)品，為延長分離液保存時(shí)間，請?jiān)跓o菌條件下啟封，避免微生物污染。
B. 分離液使用時(shí)應(yīng)始終保持室溫（18℃~25℃），如室內(nèi)溫度較低，可將分離液預(yù)熱。4℃或者是溫度較低的條件下離心，可能會(huì)導(dǎo)致白膜層中紅細(xì)胞污染加重。
C. 待分離的組織要求新鮮，避免冷凍和冷藏。
D. 部分塑料制品（如聚苯乙烯）因其帶有的靜電作用，可能會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞掛壁，影響分離效果。
如果要進(jìn)一步對分離的細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，那在制備單細(xì)胞懸液和分離過程中，注意無菌操作，避免微生物污染。
參考文獻(xiàn)：
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《Protective Role of Peroxiredoxin I in Heat-Killed Staphylococcus Aureus-infected Mice》 作者:HU-NAN SUN,YUE LIU1,JIAN-NAN WANG, CHUANG WANG, REN LIU, LING-ZU KONG, XING ZHEN, NISANSALA CHANDIMALI, YU-DONG CUI, SUN-UK KIM, DONG-SEOK LEE, DAE-YEUL YU, JI-SU KIM, DONG KEE JEONG, TAEHO KWON6 and YING-HAO HAN1 期刊:In Vivo 影響因子:1.609 PMID:31028193
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