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產(chǎn)品名稱：支原體檢測(cè)試劑盒
 
貨號(hào)：CA1080
 
保存：4℃保存，有效期為 2 年，Hoechst 工作液需要避光保存。
 
產(chǎn)品內(nèi)容：
Hoechst 33258工作液     50ml
 
固定液            50ml
 
抗熒光衰減封片液        10ml
 
說(shuō)明書              1 份
產(chǎn)品簡(jiǎn)介：
本試劑盒是利用熒光染料（bisbenzimide,Hoechst 33258）檢測(cè)支原體污染。這種染料會(huì)結(jié)合到 DNA的 A-T 富
集區(qū)域，因?yàn)橹гw的 DNA 中 A-T 含量高（55％～80％），所以可將其染色而被檢測(cè)到。被支原體污染的
細(xì)胞經(jīng)染色后在細(xì)胞周圍可看到許多大小均一的熒光小點(diǎn)，即為支原體的 DNA染色斑，說(shuō)明有支原體污染。
Hoechst 33258 的*激發(fā)波長(zhǎng)為 346nm，*發(fā)射波長(zhǎng)為 460nm；Hoechst 33258 和雙鏈DNA結(jié)合后，*
激發(fā)波長(zhǎng)為 352nm，*發(fā)射波長(zhǎng)為 461nm。
 
 
操作步驟： 
貼壁細(xì)胞：
1、被檢細(xì)胞接種于無(wú)菌的 6 孔細(xì)胞培養(yǎng)板中，接種密度為 1-2×104
。同時(shí)，接種正常無(wú)支原體感染的同種細(xì)胞，作為陰性對(duì)照。
2、5 天后，先吸去培養(yǎng)液，再加入 1ml 的固定液，靜置 20min，
3、吸去固定液，晾干。
4、于每孔中，加入 1ml 的 Hoechst33258 工作液（Hoechst 33258 工作液須覆蓋全部被檢細(xì)胞），37℃避光放置 15-20min 或室溫靜置 20～30min。
5、吸去 Hoechst 33258 工作液，加入 2ml 滅菌超純水洗滌三次，直接風(fēng)干。風(fēng)干后加入一滴封片液，并以蓋玻片覆蓋。
6、熒光顯微鏡觀察。用紫外激發(fā)光激發(fā)，觀察細(xì)胞周圍是否有藍(lán)色熒光小點(diǎn)或串珠狀熒光小點(diǎn)。 懸浮細(xì)胞：
1、收集需檢測(cè)的細(xì)胞，1500rpm，5min。
2、將收集的細(xì)胞涂片于載玻片上，再加 1ml 的固定液，靜置 20min。
3、吸去固定液，晾干。
4、于每孔中，加入 1ml 的 Hoechst33258 工作液（Hoechst 33258 工作液須覆蓋全部被檢細(xì)胞），37℃避光放置 15～20min 或室溫靜置 20～30min。
5、吸去 Hoechst 33258 工作液，用無(wú)菌水洗滌玻片 3 次，直接風(fēng)干。風(fēng)干后加入一滴封固液，并以蓋玻片覆蓋。
6、熒光顯微鏡觀察。用紫外激發(fā)光激發(fā)，觀察細(xì)胞周圍是否有藍(lán)色熒光小點(diǎn)或串珠狀熒光小點(diǎn)。
 
結(jié)果判斷（參考）：
陰性：僅見細(xì)胞的細(xì)胞核呈現(xiàn)黃綠色熒光。
陽(yáng)性：除細(xì)胞外，細(xì)胞周圍可見大量的大小均一的熒光著色顆粒。
 
注意事項(xiàng)：
1．Hoechst工作液對(duì)人體有害，請(qǐng)注意防護(hù)。
2．固定液有刺激性氣味，建議在通風(fēng)櫥進(jìn)行固定。
3．支原體檢測(cè)時(shí)，*用不含抗生素的培養(yǎng)液培養(yǎng) 2～3 代，這樣容易避免假陰性結(jié)果。
4．本試劑盒用于 6 孔板檢測(cè)時(shí)，可以進(jìn)行 50 次檢測(cè)反應(yīng)。
5．檢測(cè)支原體污染，可以使用支原體高效 Vero 細(xì)胞， 這樣可以提高檢測(cè)靈敏度，即將被檢測(cè)樣品接種于 Vero
細(xì)胞進(jìn)行檢測(cè)。
 
相關(guān)產(chǎn)品：
P2100   10×多聚賴氨酸
S2100   抗熒光衰減封片劑
C0020   Hoechst 33258染色液（即用型）