|
| 產(chǎn)地 | 中國 |
| 品牌 | Solarbio |
| 貨號 | C1100 |
| 用途 | 本公司生產(chǎn)的DH5α感受態(tài)細(xì)胞是采用大腸桿菌DH5α菌株經(jīng)特殊工藝制備得到，可用于DNA的化學(xué)轉(zhuǎn)化。使用pUC19質(zhì)粒檢測，轉(zhuǎn)化效率可達(dá)108，-70℃保存3-5個月轉(zhuǎn)化效率不發(fā)生改變 |
| 包裝規(guī)格 | 10×100μl |
| 純度 | 10×100μl% |
| CAS編號 | |
| 是否進(jìn)口 | 否 |
DH5α感受態(tài)細(xì)胞
| 產(chǎn)品編號 | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 價(jià)格 |
| C1100 | DH5α感受態(tài)細(xì)胞 | 10×100 μl | 160.00 |
DH5α 感受態(tài)細(xì)胞說明書
貨 號：C1100
規(guī) 格：10×100ul / 20×100ul
保 存：-70℃保存，運(yùn)輸為干冰包裝。自收貨之日起液氮保存至少一年，-70 ℃保存至少 6 個月。
產(chǎn)品簡介：
本公司生產(chǎn)的DH5 α 感受態(tài)細(xì)胞是采用大腸桿菌DH5 α 菌株經(jīng)特殊工藝制備得到，可用于DNA的化學(xué)轉(zhuǎn)化。使用pUC19 質(zhì)粒檢測，轉(zhuǎn)化效率可達(dá) 108，-70 ℃保存3-5 個月轉(zhuǎn)化效率不發(fā)生改變。 基因型: supE44 △lacU169 （φ80 lacZ△M15 ）hsdR17 recA1 end A1 gyrA96 thi-1 relA1
特 點(diǎn): 一種用于鋪制與培養(yǎng)質(zhì)粒平板和粘粒平板的重組缺陷的抑制型菌株。其 φ80 lacZ△M15 基因的產(chǎn)物可與pUC 載體編碼的 β-半乳糖苷酶氨基端實(shí)現(xiàn)β 互補(bǔ)，可用于藍(lán)白斑篩選。
操作方法：（以下操作均按無菌條件的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行）
1 、將感受態(tài)細(xì)胞置于冰上融化，以下實(shí)驗(yàn)以 100ul 感受態(tài)細(xì)胞為例。
2 、向感受態(tài)細(xì)胞懸液中加入需轉(zhuǎn)化的目的 DNA，注意目的DNA的體積不要超過感受態(tài)細(xì)胞懸液體積的十分之一，輕輕旋轉(zhuǎn)離心管以混勻內(nèi)容物，冰浴放置30 分鐘。
3 、將離心管置于 42℃水浴中放置 60-90 秒，然后快速轉(zhuǎn)移到冰浴中放置 2-3 分鐘，注意不要搖動離心管。
4 、向離心管中加入 500ul 無菌無抗的SOC 或LB培養(yǎng)基，37℃ 180rpm 振蕩培養(yǎng)1 小時(shí)。目的是使質(zhì)粒上相關(guān)的抗性標(biāo)記基因表達(dá)，使菌體復(fù)蘇。
5 、取適量已轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細(xì)胞涂布含相應(yīng)抗生素的 SOC 或LB平板，37℃倒置培養(yǎng) 12-16 小時(shí)。涂布用量可根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)來調(diào)整，如轉(zhuǎn)化的DNA總量較多，可取100ul 左右的轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂板；反之，如轉(zhuǎn)化的 DNA總量較少，可取200-300ul 的轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂板。過多菌液可以抑制細(xì)菌生長。如果預(yù)計(jì)的*較少，可通過離心后吸除部分培養(yǎng)液，懸浮菌體后將其涂布于一個平板中。涂布剩余的菌液可4 ℃保存，如果次日的轉(zhuǎn)化菌落數(shù)過少，可以將剩下的菌液再涂布新的平板。
注意事項(xiàng)：
1、感受態(tài)細(xì)胞應(yīng)保存在-70 ℃，不可反復(fù)凍融，否則其轉(zhuǎn)化效率將會降低。
2、實(shí)驗(yàn)過程中應(yīng)嚴(yán)格無菌操作，防止其它 DNA的污染，避免為以后的篩選、鑒定帶來影響。
3、轉(zhuǎn)化時(shí)，轉(zhuǎn)化效率與外源 DNA的濃度在一定范圍內(nèi)成正比，但當(dāng)加入的外源DNA量過多或體積過大反而會降低轉(zhuǎn)化效率。轉(zhuǎn)化時(shí)DNA體積要小于感受態(tài)細(xì)胞體積的十分之一。
4、轉(zhuǎn)化率的計(jì)算：轉(zhuǎn)化率＝產(chǎn)生菌落的總數(shù)/ 鋪板DNA總量。
5、為防止轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)不成功，可以保留部分連接產(chǎn)物，以重新轉(zhuǎn)化，將損失降到低。
相關(guān)產(chǎn)品：
I1020 IPTG 溶液 (50mg/ml)
A1170 氨芐青霉素儲存液( 100mg/ml)
K1030 Kanamyci n (100mg/ml)卡那霉素
L1015 LB固體培養(yǎng)基(干粉)
L1020 SOC液體培養(yǎng)基(干粉)
X1010 X-gal(20mg/ml)
相關(guān)文獻(xiàn)：
《Production of l-alanyl-l-glutamine by immobilized Pichia pastoris GS115 expressing α-amino acid ester acyltransferase》 作者:Yi-Min Li, Jiao-Qi Gao, Xu-Ze Pei, Cong Du, Chao Fan, Wen-Jie Yuan and Feng-Wu Bai 期刊:Microbial Cell Factories 影響因子:4.402 PMID:30711013
